4月29日(1)
吉布森组装技术(Gibson Assembly) 是一种高效的DNA片段无缝拼接方法,由Daniel Gibson团队于2009年开发。其核心特点是无需酶切位点,可在单次反应中实现多片段(通常5-6个)的精准组装,广泛应用于合成生物学和基因工程。
技术原理
1.三酶系统:
-T5核酸外切酶:从5'端消化DNA,产生粘性末端
-DNA聚合酶:填补序列缺口(常用Phusion酶)
-DNA连接酶:共价连接片段
2.同源臂设计:
-片段末端需设计15-40 bp重叠序列(overlap)
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